CD8-β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400950
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- CD8-β Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im CD8-β-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD8-β: sc-25277
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD8-β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-400950 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
CD8B kodiert CD8-β, ein Typ-I-Transmembran-Glykoprotein, das mit CD8-α heterodimerisiert und so den CD8-Korezeptor auf zytotoxischen T-Lymphozyten und bestimmten Subpopulationen von Thymozyten bildet. Durch die Bindung an MHC-Klasse-I und die Assoziation mit LCK verstärkt CD8-β die Signalstärke der TCR-Signalübertragung und unterstützt dadurch die antigenspezifische Aktivierung, die Bildung der immunologischen Synapse sowie nachgeschaltete Signalwege, die Proliferation, Zytokinproduktion und die Differenzierung zytolytischer Effektorzellen steuern. Die Expression von CD8B trägt zur thymischen Selektion und zur Aufrechterhaltung der CD8+-T-Zell-Identität bei und beeinflusst damit die Immunüberwachung und die Reaktion auf Infektionen. Fehlregulierte CD8-Korezeptor-Signale und veränderte CD8B-Expressionsmuster sind relevant für Untersuchungen zu Autoimmunität, chronischer Entzündung, Tumorimmunologie und Phänotypen der T-Zell-Erschöpfung.
Das CD8-β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CD8B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CD8B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CD8B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CD8-β-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CD8B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CD8-β-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf CD8B-Exone abzielen, die für die CD8-β-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere CD8B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom CD8-β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CD8-β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CD8B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CD8-β HDR-Plasmid (h) und CD8-β HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CD8B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CD8B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.