CD73 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400307-NIC

ヒトNT5EはCD73（ecto-5′-ヌクレオチダーゼ）をコードしており、CD73はグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型の細胞表面酵素として、細胞外AMPをアデノシンに加水分解し、細胞周辺空間におけるプリン作動性シグナル伝達およびヌクレオチドバランスを形成します。アデノシンの蓄積を調節することで、CD73はGPCR介在性のcAMPシグナル、内皮バリア機能、白血球のトラフィッキング、ならびに代謝適応や炎症シグナルと交差する低酸素応答プログラムに影響を及ぼします。CD73活性は血小板および血管応答の調節にも寄与し、組織環境に応じて、上皮間葉転換（EMT）、間質リモデリング、免疫細胞の極性化にも影響し得ます。NT5E/CD73の発現や酵素活性の破綻は、免疫調節の変化、血管石灰化に関わる表現型、腫瘍微小環境の生物学と関連することが報告されており、炎症、線維化、がん関連経路の研究における機序的ハブとしての有用性を支持します。

CD73 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NT5E 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NT5E内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NT5Eの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NT5Eが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。