Plásmido Doble Nickase (h) CD73: sc-400307-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CD73 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CD73 (h) y el plásmido de doble nickasa CD73 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a NT5E. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD73 Anticuerpo (D-12): sc-398260
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CD73 | sc-400307-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CD73 | sc-400307-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El NT5E humano codifica CD73 (ecto-5′-nucleotidasa), una enzima de superficie anclada a glicosilfosfatidilinositol que hidroliza el AMP extracelular a adenosina, moldeando así la señalización purinérgica y el equilibrio de nucleótidos en el espacio pericelular. Al regular la acumulación de adenosina, CD73 influye en la señalización de AMPc mediada por GPCR, la función de la barrera endotelial, el tráfico de leucocitos y programas sensibles a la hipoxia que se entrecruzan con la adaptación metabólica y la señalización inflamatoria. La actividad de CD73 contribuye a la modulación de las respuestas plaquetarias y vasculares y puede afectar la transición epitelio‑mesénquima, la remodelación del estroma y la polarización de células inmunitarias en diversos contextos tisulares. La expresión o la actividad enzimática desreguladas de NT5E/CD73 se han asociado con una regulación inmune alterada, fenotipos de calcificación vascular y la biología del microambiente tumoral, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de inflamación, fibrosis y vías asociadas al cáncer.
CD73 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NT5E en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NT5E. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NT5E. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NT5E alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.