Partículas Lentivirales de Activación (h) CD71/TFRC/Transferrin Receptor: sc-400310-LAC

TFRC (CD71) codifica el receptor de transferrina, una glicoproteína de membrana de tipo II que media la endocitosis dependiente de clatrina del hierro unido a transferrina y contribuye al mantenimiento de la homeostasis intracelular del hierro. Al regular la captación y la disponibilidad de hierro, CD71 influye en la síntesis de hemo, la respiración mitocondrial, la replicación del ADN y el equilibrio redox, conectando la detección de nutrientes con el metabolismo proliferativo. La expresión de TFRC está estrechamente coordinada con los programas del ciclo celular y a menudo se encuentra elevada en células que se dividen rápidamente, donde una gestión alterada del hierro puede reconfigurar las respuestas al estrés oxidativo y la reprogramación metabólica. La actividad y el tráfico de TFRC desregulados se han asociado con el crecimiento oncogénico, fenotipos relacionados con la anemia y alteraciones en la activación y diferenciación de células inmunitarias.

Las partículas de activación lentiviral CD71/TFRC/Transferrin Receptor (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TFRC en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CD71/TFRC/Transferrin Receptor (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TFRC, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CD71/TFRC/Transferrin Receptor. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TFRC y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.