Plásmido CRISPR de Activación (h) CD71/TFRC/Transferrin Receptor: sc-400310-ACT

TFRC codifica CD71, el receptor de transferrina que media la unión de alta afinidad y la endocitosis dependiente de clatrina de la transferrina para entregar hierro a las células, lo que sostiene la síntesis de hemo, la respiración mitocondrial y la replicación del ADN. Tras la acidificación endosomal y la liberación del hierro, la apotransferrina y CD71 se reciclan a la membrana plasmática, acoplando la captación de hierro al tráfico de membranas y a las vías lisosomales/endosomales. La expresión de TFRC está estrictamente regulada por elementos de respuesta al hierro y se integra con la señalización IRP/IRE, los programas de proliferación impulsados por MYC y las redes sensibles a la hipoxia que ajustan la demanda celular de hierro. La actividad desregulada de TFRC y el manejo del hierro se estudian con frecuencia en el metabolismo del cáncer, la activación de células inmunitarias, la biología relacionada con la anemia y las interacciones huésped–patógeno que dependen de la disponibilidad de hierro.

CD71/TFRC/Transferrin Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TFRC sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD71/TFRC/Transferrin Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TFRC en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TFRC, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD71/TFRC/Transferrin Receptor. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TFRC y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD71/TFRC/Transferrin Receptor en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD71/TFRC/Transferrin Receptor en células tumorales con expresión de TFRC silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.