CD63 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419564

Descripción general

Cd63 codifica CD63, una tetraspanina enriquecida en endosomas tardíos, lisosomas y vesículas extracelulares, donde organiza microdominios enriquecidos en tetraspaninas y coordina el tráfico de proteínas de membrana. CD63 participa en la maduración endosomal, la biogénesis de cuerpos multivesiculares, la clasificación de carga en exosomas y la regulación del recambio de receptores, influyendo en procesos como la adhesión celular, la migración y la señalización de células inmunitarias. A través de interacciones con integrinas y otras tetraspaninas, CD63 afecta las vías de transporte vesicular que moldean la presentación de antígenos y la comunicación intercelular. La expresión o localización alteradas de CD63 se utilizan con frecuencia como parámetro de lectura en biología del cáncer, inflamación y modelos de enfermedades infecciosas debido a su estrecha asociación con la dinámica de vesículas y la señalización del microambiente tumoral.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CD63 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cd63 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cd63 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cd63 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CD63.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cd63 para la investigación de la señalización de CD63, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cd63 críticos para la función de CD63
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cd63 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CD63 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CD63 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cd63. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CD63 (m) y el plásmido HDR CD63 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cd63 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cd63 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.