Plásmido CRISPR de Activación (h) CD57: sc-402750-ACT

B3GAT1, comúnmente asociado con el epítopo carbohidratado CD57 (HNK-1), codifica una β-1,3-glucuroniltransferasa que contribuye a la biosíntesis de estructuras glicánicas HNK-1 en glicoproteínas y glicolípidos de la superficie celular. Este programa de glicosilación respalda el reconocimiento, la adhesión y la señalización célula a célula en contextos de neurodesarrollo e inmunitarios, e influye en procesos como el crecimiento de neuritas, la organización sináptica y la diferenciación de linfocitos. Los glicanos asociados a CD57/HNK-1 se utilizan ampliamente como marcadores de subpoblaciones maduras de células NK y T, y se han vinculado a una remodelación alterada de glicanos en fenotipos neurológicos e inflamatorios. La glicosilación dependiente de B3GAT1 desregulada puede perturbar las interacciones con la matriz extracelular y las vías de señalización de receptores que dependen de un patrón glicánico preciso.

CD57 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de B3GAT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD57 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus B3GAT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional B3GAT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD57. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo B3GAT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD57 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD57 en células tumorales con expresión de B3GAT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.