CD55 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419939-ACT

Cd55 kodiert CD55 (Decay-Accelerating Factor), einen über einen Glycosylphosphatidylinositol-(GPI)-Anker an die Zelloberfläche gebundenen Regulator, der Wirtszellen vor komplementvermittelter Schädigung schützt, indem er den Zerfall von C3/C5-Konvertasen beschleunigt. Durch die Begrenzung der Komplementamplifikation beeinflusst CD55 die angeborene Immun-Signalgebung, die Opsonisierungsdynamik sowie die entzündliche Kommunikation an Gewebebarrieren und im Gefäßsystem. In Mausmodellen ist eine veränderte CD55-Aktivität mit einer fehlregulierten Komplementaktivierung verbunden, die die Anfälligkeit für immunvermittelte Pathologien, den Verlauf von Infektionen und Tumor–Immun-Interaktionen prägen kann. Seine Expression ist daher relevant für Studien zur Komplementkontrolle, zu Leukozyten–Endothel-Interaktionen und zu Entzündungsprozessen im Mikromilieu.

CD55 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Cd55-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD55 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Cd55-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Cd55-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD55-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Cd55-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD55-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD55-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Cd55-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.