Plasmide CRISPR d'Activation (m) CD5: sc-419560-ACT

Le gène Cd5 de la souris code CD5, une glycoprotéine de surface de la famille des récepteurs scavenger riches en cystéines, qui module la signalisation des récepteurs antigéniques dans les lymphocytes T et dans un sous-ensemble de lymphocytes B. CD5 participe à l’organisation de la synapse immunologique et ajuste les seuils d’activation en intégrant des signaux en aval du récepteur des cellules T (TCR) et des voies associées de kinases de la famille Src, influençant la production de cytokines et la survie des lymphocytes. Par son rôle dans le maintien de l’homéostasie immunitaire et de la tolérance périphérique, une expression ou une signalisation altérées de CD5 ont été associées à une activation lymphocytaire dérégulée et à des phénotypes immunitaires inflammatoires. Cd5 constitue donc un levier moléculaire utile pour étudier les rétrocontrôles de signalisation, la différenciation des lymphocytes et les mécanismes qui façonnent les réponses immunitaires adaptatives dans des modèles murins.

CD5 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cd5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD5 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cd5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cd5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cd5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD5 dans les cellules tumorales présentant une expression de Cd5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.