CD5 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419560-ACT

Das murine Cd5-Gen kodiert CD5, ein Oberflächen-Glykoprotein aus der Familie der „scavenger receptor cysteine-rich“-Rezeptoren, das die Antigenrezeptor-Signalübertragung in T-Zellen und einer Untergruppe von B-Zellen moduliert. CD5 ist an der Organisation der immunologischen Synapse beteiligt und justiert Aktivierungsschwellen, indem es Signale nachgeschaltet an den T‑Zell‑Rezeptor sowie an zugehörige Src-Familien-Kinasewege integriert; dadurch beeinflusst es die Zytokinproduktion und das Überleben von Lymphozyten. Aufgrund seiner Rolle bei der Aufrechterhaltung der Immunhomöostase und der peripheren Toleranz wurde eine veränderte CD5-Expression oder -Signalgebung mit fehlregulierter Lymphozytenaktivierung und entzündlichen Immunphänotypen in Verbindung gebracht. Cd5 ist daher ein nützlicher molekularer Ansatzpunkt, um in Mausmodellen Signalrückkopplungen, die Lymphozytendifferenzierung und Mechanismen zu untersuchen, die adaptive Immunantworten prägen.

CD5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Cd5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Cd5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Cd5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Cd5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Cd5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.