CD47 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400508-ACT

Das humane CD47-Gen kodiert ein breit exprimiertes, an der Zelloberfläche lokalisiertes Protein der Immunglobulin-Superfamilie, das als „Selbst“-Erkennungssignal und als Adhäsionsrezeptor fungiert. CD47 interagiert mit SIRPα auf myeloischen Zellen, um Phagozytose und Immunüberwachung zu modulieren, und bindet außerdem Thrombospondin‑1, wodurch Integrin-Signalwege, Zytoskelettdynamik und Zellmigration beeinflusst werden. Über diese Interaktionen trägt CD47 zu Prozessen wie Leukozyten-Trafficking, Gefäß- und Thrombozytenbiologie sowie zur Regulation entzündlicher Antworten bei. Eine dysregulierte CD47-Expression wurde mit veränderten Tumor–Immun-Interaktionen, hämatologischen Malignomen sowie entzündlichen oder fibrotischen Pathologien in Verbindung gebracht und ist daher ein häufiges Ziel mechanistischer Studien zur Immunflucht und zum Remodeling des Gewebemikromilieus.

CD47 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD47-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD47 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD47-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD47-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD47-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD47-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD47-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD47-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD47-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.