Partículas Lentivirales de Activación (h2) CD45: sc-400245-LAC-2

El gen humano PTPRC codifica CD45, una fosfatasa de tirosina proteica de tipo receptor expresada en la mayoría de las células hematopoyéticas que ajusta los umbrales de señalización al desfosforilar sustratos clave en las cascadas de receptores inmunitarios. CD45 es un regulador central de la señalización del receptor de células T y del receptor de células B mediante la modulación de quinasas de la familia Src (p. ej., LCK, FYN), influyendo así en la activación, la diferenciación y las respuestas de citocinas de los linfocitos. Las alteraciones en la expresión de CD45 o en el uso de sus isoformas se vinculan con la desregulación inmunitaria y se han asociado con fenotipos autoinmunes y con la biología de las neoplasias hematológicas, por lo que es un marcador ampliamente utilizado para el perfilado de leucocitos. Las herramientas de investigación para PTPRC/CD45 respaldan estudios de transducción de señales, control de retroalimentación dependiente de fosfatasas y genómica funcional en células inmunitarias primarias y en sistemas modelo diseñados.

Las partículas de activación lentiviral CD45 (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PTPRC en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CD45 (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PTPRC, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CD45. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PTPRC y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.