Plásmido Doble Nickase (h) CD43: sc-402688-NIC

SPN codifica CD43 (leucosialina), una sialomucina fuertemente O‑glicosilada que se expresa en la mayoría de las células hematopoyéticas y regula la adhesión, la migración y la activación de los leucocitos. CD43 modula la arquitectura de la sinapsis inmunológica y las interacciones célula–célula al influir en la adhesión dependiente de integrinas, la dinámica del citoesqueleto y la señalización aguas abajo de los receptores de antígeno en células T y B. A través de sus efectos sobre el tráfico celular y los umbrales de activación, CD43 contribuye a las respuestas inflamatorias y a la homeostasis inmunitaria en linajes mieloides y linfoides. La alteración de la expresión de CD43 o de la composición de sus glicoformas se evalúa con frecuencia en investigaciones sobre desregulación inmunitaria y neoplasias hematológicas como un marcador asociado al estado de diferenciación y a señalización aberrante.

CD43 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SPN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SPN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SPN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SPN alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.