Plásmido Doble Nickase (m) CD40: sc-423444-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)CD40 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CD40 (m) y el plásmido de doble nickasa CD40 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Cd40. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD40 Anticuerpo (HM40-3): sc-20010
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) CD40 | sc-423444-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen Cd40 de ratón codifica CD40, un miembro de la superfamilia de receptores del TNF que se expresa en células presentadoras de antígeno y otros subgrupos inmunitarios, donde media la comunicación coestimuladora con CD40L para coordinar respuestas inmunitarias adaptativas. La señalización de CD40 recluta proteínas adaptadoras TRAF para activar las vías de NF-κB canónica y no canónica, MAPK y PI3K, impulsando la producción de citocinas, los programas de presentación de antígeno y las decisiones de supervivencia celular. En las células B, CD40 contribuye a la formación del centro germinal, la recombinación de cambio de clase y la maduración de afinidad, mientras que en las células mieloides modula la activación inflamatoria y la comunicación cruzada con las células T. La actividad desregulada del eje CD40 se ha implicado en fenotipos autoinmunes y de inflamación crónica, respuestas inmunitarias relacionadas con trasplantes y la remodelación del microambiente inmunitario tumoral, lo que lo convierte en una diana frecuente en estudios de inmunología mecanística.
CD40 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cd40 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cd40. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cd40. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cd40 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.