CD4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400237-ACT

Humanes CD4 kodiert ein Typ‑I‑Transmembran‑Glykoprotein, das überwiegend auf T‑Helfer‑Lymphozyten sowie auf Subpopulationen dendritischer Zellen und Makrophagen exprimiert wird. Dort fungiert es als Korezeptor, der TCR–MHC‑Klasse‑II‑Interaktionen stabilisiert und die frühe Signalübertragung über LCK verstärkt. CD4‑abhängige Signalwege beeinflussen T‑Zell‑Aktivierung, Differenzierung und Zytokinprogramme, die die adaptive Immunantwort formen, einschließlich von Signalwegen, die die Antigenpräsentation und die Bildung der immunologischen Synapse steuern. Eine dysregulierte CD4‑Expression oder ‑Funktion ist mit einer veränderten Immunhomöostase in entzündlichen und autoimmunen Kontexten verbunden und steht im Zentrum von Studien zu Wirt–Pathogen‑Interaktionen, da CD4 die Tropismus‑Eigenschaften von Immunzellen mitbestimmt. Als Oberflächen‑Linienmarker wird CD4 zudem breit genutzt, um Immunzell‑Subsets in der Immunonkologie und in der Systemimmunologie zu stratifizieren.

CD4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.