Partículas Lentivirales de Activación (m) CD39: sc-419549-LAC

Entpd1 codifica la ectonucleotidasa CD39 (ENTPD1), una enzima de superficie celular que hidroliza el ATP y el ADP extracelulares a AMP, modulando la señalización purinérgica en los compartimentos vascular, inmunitario y estromal del ratón. Al regular la disponibilidad de nucleótidos, CD39 influye en la señalización inflamatoria, en las respuestas plaquetarias y endoteliales, y en el equilibrio entre las señales de peligro impulsadas por ATP y las vías inmunorreguladoras generadoras de adenosina en conjunto con CD73. La actividad de CD39 se asocia con la modulación de la activación leucocitaria, la producción de citocinas y las respuestas a lesión tisular, lo que convierte a Entpd1 en un objetivo relevante en modelos de inflamación, trombosis, lesión por isquemia-reperfusión y regulación inmunitaria asociada a tumores. Su expresión se estudia comúnmente en células T reguladoras, poblaciones mieloides y endotelio, donde el metabolismo de nucleótidos extracelulares controla la comunicación célula–célula.

Las partículas de activación lentiviral CD39 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Entpd1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CD39 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Entpd1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CD39. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Entpd1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.