Particules Lentivirales d'Activation (h) CD38: sc-401117-LAC

Le CD38 humain code une ectoenzyme et un récepteur transmembranaires de type II qui catalyse le métabolisme du NAD+ afin de générer des seconds messagers tels que l’ADP-ribose cyclique et l’ADP-ribose, régulant ainsi la mobilisation intracellulaire du Ca2+. L’activité de CD38 fait le lien entre l’état métabolique et des processus de signalisation qui influencent l’activation, la différenciation, l’adhésion et les réponses cytokiniques des lymphocytes, avec des rôles supplémentaires dans l’équilibre redox cellulaire via des voies dépendantes du NAD+. CD38 est fortement exprimé dans des sous-populations de cellules immunitaires et est fréquemment étudié dans le contexte de l’immunométabolisme, de la signalisation inflammatoire et des interactions tumeur–système immunitaire. Une expression dérégulée de CD38 ou une altération de sa fonction enzymatique a été associée à une homéostasie immunitaire perturbée et à des modifications de la signalisation du microenvironnement dans les hémopathies malignes et d’autres maladies où la consommation de NAD+ et la signalisation dépendante du Ca2+ sont perturbées.

Les particules d'activation lentivirales CD38 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CD38 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CD38 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CD38, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CD38. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CD38 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.