CD38 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401117-ACT

Humanes CD38 kodiert ein multifunktionales Typ-II-Transmembran-Glykoprotein, das als Ektoenzym und Rezeptor wirkt und den NAD+-Stoffwechsel katalysiert, wobei Signalmoleküle wie zyklisches ADP-Ribose und ADP-Ribose entstehen. Durch die Regulation der intrazellulären Ca2+-Mobilisierung und der NAD+-abhängigen Signalübertragung beeinflusst CD38 die Aktivierung, Adhäsion und Kommunikation von Immunzellen in entzündlichen Mikroumgebungen. Die CD38-Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen, die den zellulären Stoffwechsel und Stressreaktionen steuern, und eine veränderte Expression wird häufig im Zusammenhang mit Immundysregulation und der Biologie hämatologischer Malignome untersucht. Als Oberflächenmarker und Signalknotenpunkt wird CD38 routinemäßig hinsichtlich seiner Rolle bei der Lymphozytendifferenzierung, der Funktion myeloider Zellen und Tumor–Immun-Interaktionen erforscht.

CD38 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD38-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD38 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD38-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD38-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD38-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD38-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD38-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD38-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD38-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.