Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD362/SDC2/Syndecan-2: sc-401392-ACT

SDC2 code la syndécane‑2 (CD362), un protéoglycane transmembranaire à héparane sulfate qui organise la matrice péricellulaire et agit comme co‑récepteur de facteurs de croissance, de chimiokines et de ligands de la matrice extracellulaire. En coordonnant des interactions avec les intégrines, les kinases de la famille Src et la signalisation des GTPases Rho, la syndécane‑2 module la dynamique des adhérences focales, le remodelage du cytosquelette et la migration cellulaire, avec des effets en aval sur des voies telles que FAK/ERK et Wnt/β‑caténine. SDC2 contribue également à la communication cellule‑cellule et à l’activité des protéases via le clivage (shedding) de son ectodomaine, influençant des microenvironnements angiogéniques et inflammatoires. Une expression dérégulée de SDC2 a été associée à l’invasion des cellules tumorales, au remodelage lié à la fibrose et à des altérations de la signalisation stromale, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans des études de signalisation pertinentes pour les maladies.

CD362/SDC2/Syndecan-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SDC2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD362/SDC2/Syndecan-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SDC2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SDC2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD362/SDC2/Syndecan-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SDC2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD362/SDC2/Syndecan-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD362/SDC2/Syndecan-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SDC2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.