Plásmido CRISPR de Activación (h) CD35: sc-401210-ACT

El receptor del complemento 1 (CR1), también conocido como CD35, es una glucoproteína de superficie celular expresada en eritrocitos, leucocitos y células dendríticas foliculares, que se une a las opsoninas del complemento C3b y C4b para promover la eliminación de complejos inmunes y regular la amplificación de la cascada del complemento. Al acelerar la disociación de las convertasas de C3/C5 y actuar como cofactor para la escisión de C3b/C4b mediada por el factor I, CD35 modula la señalización de la inmunidad innata, la fagocitosis y el manejo de antígenos durante las respuestas inflamatorias. La función de CR1 se relaciona con las vías clásica y alternativa del complemento, e influye en la defensa del huésped, el tráfico de complejos inmunes y la comunicación con procesos mediados por receptores Fc. La variación genética y de expresión en CR1 se ha asociado con cambios en la susceptibilidad y en la fisiopatología de la inflamación impulsada por complejos inmunes, así como con fenotipos neuroinflamatorios y hematológicos vinculados al complemento, lo que respalda su utilidad como diana mecanística de investigación.

CD35 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD35 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD35. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD35 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD35 en células tumorales con expresión de CR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.