Plásmido Doble Nickase (h) CD33: sc-401011-NIC

CD33 (Siglec-3) es una lectina tipo inmunoglobulina que se une al ácido siálico y se expresa predominantemente en células del linaje mieloide, donde funciona como un receptor inhibidor que atenúa la activación inmunitaria. A través de la señalización mediada por el motivo inhibidor basado en tirosina de los receptores inmunitarios (ITIM) y el reclutamiento de fosfatasas como SHP-1/2, CD33 modula vías posteriores que controlan la producción de citocinas, la fagocitosis y los umbrales de activación celular. CD33 participa en la regulación de la homeostasis de la inmunidad innata y de las respuestas microgliales, conectando el reconocimiento de glicanos con programas de señalización inhibidora. La expresión o función alteradas de CD33 se han implicado en neoplasias mieloides y en procesos neuroinflamatorios, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de la regulación inmunitaria y de fenotipos mieloides asociados a enfermedad.

CD33 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD33 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD33. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD33. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD33 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.