CD33 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2): sc-419543-KO-2

Visão geral

Cd33 codifica a CD33, uma lectina do tipo imunoglobulina com afinidade por ácido siálico (Siglec) expressa principalmente em células da linhagem mieloide, onde atua como um recetor inibitório que ajuda a modular a ativação da imunidade inata. Por meio de motivos inibitórios baseados em tirosina de recetores imunitários (ITIMs), a CD33 pode recrutar fosfatases como SHP-1/SHP-2 para atenuar a sinalização a jusante de recetores de reconhecimento de padrões e de outros estímulos ativadores, moldando a produção de citocinas, a fagocitose e os níveis basais de inflamação. Em modelos murinos, Cd33 é amplamente utilizado para investigar circuitos regulatórios de micróglia e macrófagos, incluindo o reconhecimento do “próprio” dependente de sialilação e checkpoints glicoimunitários. Alterações na atividade e na expressão de CD33 estão associadas a respostas mieloides desreguladas em neuroinflamação e noutros contextos de doenças mediadas pelo sistema imunitário, o que a torna um ponto relevante para estudos mecanísticos da homeostase imunitária.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CD33 (m2) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Cd33 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Cd33, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Cd33 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CD33.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Cd33 para a investigação da sinalização de CD33, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Cd33 críticos para a função CD33
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Cd33 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CD33 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo CD33 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Cd33. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CD33 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR CD33 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Cd33 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Cd33 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.