CD33 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m2): sc-419543-KO-2

Descripción general

Cd33 codifica CD33, una lectina tipo inmunoglobulina que se une al ácido siálico (Siglec) y se expresa principalmente en células de la línea mieloide, donde actúa como receptor inhibidor que ayuda a ajustar la activación de la inmunidad innata. A través de motivos inhibidores basados en tirosina del inmunorreceptor (ITIM), CD33 puede reclutar fosfatasas como SHP-1/SHP-2 para atenuar la señalización aguas abajo de los receptores de reconocimiento de patrones y de otras señales activadoras, modulando la producción de citocinas, la fagocitosis y los puntos de ajuste inflamatorios. En sistemas de ratón, Cd33 se utiliza ampliamente para estudiar circuitos reguladores de microglía y macrófagos, incluida la “autorreconocimiento” dependiente de la sialilación y los puntos de control glico-inmunes. La actividad y la expresión alteradas de CD33 se asocian con respuestas mieloides desreguladas en la neuroinflamación y en otros contextos de enfermedades mediadas por el sistema inmunitario, lo que lo convierte en un nodo relevante para estudios mecanísticos de la homeostasis inmunitaria.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CD33 (m2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cd33 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cd33 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cd33 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CD33.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cd33 para la investigación de la señalización de CD33, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cd33 críticos para la función de CD33
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cd33 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CD33 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CD33 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cd33. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CD33 (m) y el plásmido HDR CD33 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cd33 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cd33 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.