Plásmido CRISPR de Activación (h) CD33: sc-401011-ACT

El CD33 humano codifica una lectina tipo inmunoglobulina de unión a ácido siálico (Siglec-3) que se expresa predominantemente en células del linaje mieloide, donde funciona como un receptor inhibidor que atenúa la activación celular. A través de la señalización mediada por motivos inhibidores basados en tirosina de receptores inmunitarios (ITIM) y el reclutamiento de fosfatasas como SHP-1/2, CD33 modula los umbrales de la inmunidad innata, las respuestas de citocinas y los programas fagocíticos. CD33 participa en el reconocimiento de glicanos sialilados e influye en vías que regulan la diferenciación mieloide, el procesamiento de antígenos y la señalización inflamatoria. Las alteraciones en la expresión y la señalización de CD33 se han asociado con neoplasias mieloides y con contextos de neuroinflamación, lo que respalda su uso como marcador y como nodo mecanístico en la investigación de la biología hematopoyética e inmunitaria.

CD33 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD33 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD33 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD33 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD33, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD33. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD33 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD33 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD33 en células tumorales con expresión de CD33 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.