Partículas Lentivirales de Activación (h) CD300E: sc-415572-LAC

CD300E (también conocido como IREM-2) codifica un receptor de la superfamilia de las inmunoglobulinas que se expresa principalmente en células del linaje mieloide, donde modula la activación inmunitaria innata y la señalización inflamatoria. La interacción de CD300E puede acoplarse a vías dependientes de adaptadores que promueven programas de activación celular, incluida la producción de citocinas, las respuestas fagocíticas y la maduración de células presentadoras de antígeno, en conexión con procesos asociados a NF-κB y MAPK. La regulación alterada de la señalización de receptores mieloides es relevante en estados de desregulación inmunitaria y en la biología de enfermedades inflamatorias, y los patrones de expresión de CD300E se evalúan con frecuencia en estudios de activación leucocitaria y de microambientes inmunitarios tisulares. Como inmunorreceptor de superficie celular, CD300E también es útil para dilucidar cómo las redes de receptores activadores determinan la polarización funcional de macrófagos y células dendríticas.

Las partículas de activación lentiviral CD300E (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CD300E en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CD300E (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CD300E, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CD300E. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CD300E y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.