Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD300A (h): sc-416522

Présentation

CD300A (également connu sous le nom d’IRp60) code un récepteur de la superfamille des immunoglobulines exprimé principalement par les cellules myéloïdes, notamment les monocytes, les macrophages et certains sous-ensembles de cellules dendritiques. Grâce à des motifs inhibiteurs à base de tyrosine des récepteurs immunitaires (ITIM) situés dans sa queue cytoplasmique, CD300A recrute des phosphatases telles que SHP-1/2 afin d’atténuer les cascades de signalisation activatrices et de moduler la production de cytokines, la phagocytose et les réponses aux complexes immuns. La signalisation de CD300A recoupe les voies des récepteurs de l’immunité innée, en définissant les seuils d’activation inflammatoire et la communication intercellulaire au sein des microenvironnements tissulaires. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de CD300A ont été associées à une inflammation dérégulée et à des perturbations de l’homéostasie immunitaire dans des contextes tels que les maladies auto-immunes et allergiques, ainsi que dans la recherche en immunologie des tumeurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD300A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CD300A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CD300A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CD300A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD300A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CD300A pour l'étude de la signalisation de CD300A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CD300A essentiels à la fonction de CD300A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CD300A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CD300A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CD300A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CD300A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CD300A plasmide HDR (h) et le CD300A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CD300A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CD300A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.