CD30 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402068-ACT

TNFRSF8 kodiert CD30, ein Mitglied der TNF-Rezeptor-Superfamilie, das auf aktivierten Lymphozyten exprimiert wird und an der Regulation von Zellaktivierung, Proliferation und Überleben beteiligt ist. Die CD30-Signalübertragung bindet Adapterproteine, um die Aktivität der NF-κB- und MAPK-Signalwege zu modulieren, und formt dadurch Transkriptionsprogramme, die mit Immunantworten und zellulärem Stress verknüpft sind. Eine dysregulierte CD30-Expression und -Signalgebung wird im Kontext lymphoider Malignome und inflammatorischer Mikroumgebungen untersucht, in denen veränderte rezeptorvermittelte Signale Wachstums- und Differenzierungszustände beeinflussen können. Als Oberflächenrezeptor mit induzierbarer Expression dient CD30 als gut zugänglicher Ansatzpunkt, um rezeptorgetriebene transkriptionelle Regulation und nachgeschaltetes Netzwerk-Remodeling in menschlichen Zellen zu untersuchen.

CD30 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TNFRSF8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD30 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TNFRSF8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TNFRSF8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD30-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TNFRSF8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD30-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD30-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TNFRSF8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.