Plásmido CRISPR de Activación (h) CD3-ε: sc-400240-ACT

CD3E codifica CD3-ε, un componente esencial del complejo TCR-CD3 del receptor de células T (TCR), que acopla el reconocimiento de antígenos con la señalización intracelular necesaria para el desarrollo de los timocitos y la activación de las células T periféricas. A través de sus motivos de activación basados en tirosina del inmunorreceptor (ITAM) presentes en las cadenas CD3, CD3-ε favorece cascadas de quinasas proximales en las que participan LCK y ZAP70 y propaga vías aguas abajo como NF-κB, NFAT y MAPK para regular la producción de citocinas, la proliferación y la diferenciación. La alteración de la expresión de CD3E o del ensamblaje del complejo CD3 puede desajustar los umbrales de señalización del TCR, modificar la homeostasis inmunitaria y contribuir a fenotipos de desregulación inmune. Como molécula definitoria de linaje en las células T, CD3-ε se utiliza ampliamente en estudios sobre la arquitectura de la señalización del receptor, los estados funcionales de las células T y modelos de inmuno-oncología in vitro.

CD3-ε El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD3E sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD3-ε El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD3E en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD3E, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD3-ε. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD3E y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD3-ε en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD3-ε en células tumorales con expresión de CD3E silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.