Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD2AP: sc-401218-ACT

Le gène humain **CD2AP** code la **protéine associée à CD2 (CD2-associated protein)**, une protéine adaptatrice/échafaudage qui couple les récepteurs membranaires au cytosquelette d’actine et coordonne l’endocytose, le trafic vésiculaire et la transduction du signal. CD2AP participe à l’organisation du diaphragme de fente et du cytosquelette des podocytes, à l’internalisation des récepteurs et à la stabilité des jonctions via des interactions avec la néphrine, c-Cbl et des complexes régulateurs de l’actine, influençant les voies PI3K/AKT et d’autres voies apparentées contrôlant la survie cellulaire et la morphologie. Une expression ou une fonction altérée de CD2AP a été associée à des défauts de la barrière de filtration glomérulaire, à des néphropathies protéinuriques et à des phénotypes plus larges liés à une dérégulation de la dynamique du cytosquelette et de la signalisation des cellules immunitaires. Ce gène est donc largement étudié dans des modèles de biologie des podocytes, de trafic membranaire et de réseaux de signalisation dépendant des récepteurs.

CD2AP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD2AP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD2AP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD2AP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD2AP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD2AP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD2AP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD2AP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD2AP dans les cellules tumorales présentant une expression de CD2AP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.