Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
CD27L Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423453
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CD27L El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CD27L, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD27L Anticuerpo (G-7): sc-365539
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CD27L Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423453 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Cd70 codifica CD27L (CD70), un ligando de membrana tipo II de la superfamilia TNF que se une a CD27 en células T, células B y células NK para modular la señalización coestimuladora. Las interacciones CD27–CD70 modelan la activación de la inmunidad adaptativa, favoreciendo la expansión, la supervivencia y la diferenciación de los linfocitos mediante programas transcripcionales aguas abajo vinculados a NF-κB y MAPK. La regulación estricta de la expresión de CD70 en células presentadoras de antígeno activadas ayuda a equilibrar el cebado inmunitario con la homeostasis inmunitaria. La señalización desregulada de CD70 se ha implicado en respuestas inflamatorias aberrantes, alteraciones en la dinámica de los centros germinales y disfunción inmunitaria relevante para la investigación en autoinmunidad e inmunobiología del cáncer.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CD27L (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cd70 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cd70 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cd70 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CD27L.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cd70 para la investigación de la señalización de CD27L, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Cd70 críticos para la función de CD27L
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cd70 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CD27L CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CD27L CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cd70. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CD27L (m) y el plásmido HDR CD27L (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cd70 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cd70 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.