CD27L CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402625-ACT

Humanes CD70 (CD27L) ist ein Typ‑II‑Transmembranprotein der TNF‑Liganden‑Superfamilie, das vor allem auf aktivierten antigenpräsentierenden Zellen sowie auf Subpopulationen von Lymphozyten exprimiert wird. Durch die Bindung an CD27 auf T‑Zellen, B‑Zellen und NK‑Zellen unterstützt CD70 kostimulatorische Signale, die klonale Expansion, Überleben und Differenzierung prägen und damit Keimzentrumsreaktionen und das immunologische Gedächtnis beeinflussen. Diese Achse ist in NF‑κB‑ und MAPK‑gekoppelte Transkriptionsprogramme nachgeschaltet an Signale der TNFR‑Familie eingebunden und trägt zur Zytokinproduktion sowie zur zytotoxischen Effektorfunktion bei. Eine fehlregulierte CD70‑Expression wurde in verschiedenen entzündlichen und onkologischen Forschungskontexten mit veränderter Immunaktivierung und Phänotypen der Immunflucht in Verbindung gebracht und ist daher für Studien zur Tumorimmunologie und zur Immunhomöostase relevant.

CD27L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD70-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD27L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD70-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD70-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD27L-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD70-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD27L-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD27L-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD70-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.