Plásmido CRISPR de Activación (h) CD27: sc-401938-ACT

CD27 codifica una molécula coestimuladora de la superfamilia de receptores de TNF que se expresa principalmente en células T, células B de memoria y subpoblaciones de células NK, donde se une a CD70 para amplificar la activación de linfocitos inducida por antígenos. La señalización de CD27 activa las vías canónicas y no canónicas de NF-κB, junto con las cascadas MAPK y PI3K/AKT, favoreciendo la proliferación, la supervivencia, la producción de citocinas y el desarrollo de una memoria inmunitaria duradera. Por su papel en la conformación de respuestas efectoras y de memoria, la actividad alterada de CD27/CD70 se ha asociado con desregulación inmunitaria y microambientes inflamatorios, y la expresión de CD27 se utiliza con frecuencia para fenotipar estados de diferenciación linfocitaria. Estas propiedades hacen de CD27 un nodo útil para estudiar redes de señalización de la inmunidad adaptativa, la coestimulación célula–célula y la disfunción inmunitaria dependiente del contexto.

CD27 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD27 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD27 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD27 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD27, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD27. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD27 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD27 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD27 en células tumorales con expresión de CD27 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.