CD27 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401938-ACT

CD27 codifica uma molécula coestimulatória da superfamília de receptores de TNF, expressa principalmente em células T, células B de memória e em subpopulações de células NK, nas quais se liga ao CD70 para amplificar a ativação de linfócitos induzida por antígeno. A sinalização de CD27 envolve as vias canônica e não canônica de NF-κB, juntamente com as cascatas de MAPK e PI3K/AKT, sustentando proliferação, sobrevivência, produção de citocinas e o desenvolvimento de uma memória imunológica duradoura. Pelo seu papel em moldar respostas efetoras e de memória, alterações na atividade CD27/CD70 têm sido associadas à desregulação imune e a microambientes inflamatórios, e a expressão de CD27 é frequentemente usada para fenotipar estados de diferenciação de linfócitos. Essas propriedades tornam o CD27 um nó útil para estudar redes de sinalização da imunidade adaptativa, coestimulação célula–célula e disfunção imune dependente do contexto.

CD27 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD27 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD27 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD27 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD27, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD27. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD27 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD27 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD27 em células tumorais com expressão de CD27 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.