Particules Lentivirales d'Activation (h) CD223: sc-406616-LAC

LAG3 (CD223) code un récepteur inhibiteur de point de contrôle immunitaire exprimé sur les lymphocytes T activés, les lymphocytes T régulateurs, les cellules NK et certains sous-ensembles de lymphocytes épuisés. CD223 se lie au CMH de classe II et à d’autres ligands pour atténuer la signalisation du TCR, modulant la fonction de la synapse immunologique, la production de cytokines et la différenciation effectrice, et s’intègre à des voies qui régulent les seuils d’activation et l’homéostasie immunitaire. LAG3 est fréquemment surexprimé lors d’expositions antigéniques chroniques et constitue un marqueur des programmes de dysfonctionnement des lymphocytes T, qui coexistent avec d’autres molécules de checkpoint. Les altérations de l’expression et de la signalisation de LAG3 sont donc largement étudiées en immunologie des tumeurs, dans des modèles d’infections virales persistantes et dans l’inflammation auto-immune, comme déterminants des états d’immunosuppression versus d’activation immunitaire.

Les particules d'activation lentivirales CD223 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de LAG3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CD223 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription LAG3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CD223. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif LAG3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.