CD203c Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404517
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CD203c El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CD203c, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD203c Anticuerpo (1G11): sc-293363
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CD203c Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404517 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
ENPP3 codifica la ectonucleótido pirofosfatasa/fosfodiesterasa 3 (CD203c), una ectoenzima transmembrana de tipo II que hidroliza sustratos nucleotídicos extracelulares para modular la señalización purinérgica y el equilibrio local de fosfato/pirofosfato. CD203c se expresa de forma destacada en basófilos y mastocitos y se regula al alza rápidamente tras la activación mediada por FcεRI, vinculando el metabolismo de nucleótidos con programas de desgranulación y señalización inflamatoria. Mediante la regulación de nucleótidos extracelulares, ENPP3 influye en la dinámica de señalización en la superficie celular, la liberación de citocinas y la comunicación entre células inmunitarias dentro de los microambientes tisulares. La expresión alterada de ENPP3/CD203c se ha asociado con desregulación inmunitaria y se utiliza ampliamente como marcador funcional en estudios de inflamación alérgica y estados relacionados de activación de células inmunitarias.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CD203c (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ENPP3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ENPP3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ENPP3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CD203c.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ENPP3 para la investigación de la señalización de CD203c, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de ENPP3 críticos para la función de CD203c
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ENPP3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CD203c CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CD203c CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ENPP3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CD203c (h) y el plásmido HDR CD203c (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ENPP3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ENPP3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.