CD20 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-416765-LAC

MS4A1 codifica CD20, una proteina di membrana tetraspanning altamente espressa nelle cellule della linea B che regola il flusso di calcio e la segnalazione dipendente dal recettore delle cellule B (BCR). CD20 contribuisce all’attivazione, alla proliferazione e alla differenziazione delle cellule B attraverso vie che intersecano la segnalazione PI3K–AKT, NF-κB e MAPK e modulano le risposte guidate dall’antigene. Un’espressione alterata di MS4A1/CD20 è strettamente associata all’identità di linea delle cellule B e agli stati del microambiente immunitario, rendendola una caratteristica molecolare frequentemente studiata in modelli di neoplasie delle cellule B e di disregolazione delle cellule B associata ad autoimmunità. Di conseguenza, MS4A1 rappresenta un nodo utile per interrogare il circuito di segnalazione delle cellule B, le transizioni di linea e l’eterogeneità immunofenotipica in sistemi cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale CD20 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MS4A1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CD20 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MS4A1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CD20. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MS4A1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.