CD2 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-419537-LAC

Il gene murino *Cd2* codifica CD2, un recettore di adesione e costimolazione di superficie espresso principalmente su cellule T e cellule NK, che rafforza la formazione della sinapsi immunologica tramite interazioni con CD58/CD48 e coordina la segnalazione con il complesso del recettore delle cellule T. L’ingaggio di CD2 contribuisce all’attivazione di cascate prossimali di chinasi tirosiniche che coinvolgono LCK, FYN e ZAP70, modellando a valle programmi trascrizionali dipendenti da MAPK e NF-κB che regolano l’attivazione, la produzione di citochine e la funzione effettrice citotossica. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di CD2 sono state associate a una regolazione anomala dell’attivazione e della tolleranza dei linfociti, rendendo *Cd2* un nodo utile per lo studio dei meccanismi infiammatori e autoimmuni, nonché dell’elusione immunitaria nei microambienti tumorali. Nei modelli murini, la biologia di CD2 è spesso sfruttata per analizzare lo sviluppo delle cellule T, il traffico/migrazione e l’espansione guidata dall’antigene.

Le particelle di attivazione lentivirale CD2 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Cd2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CD2 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Cd2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CD2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Cd2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.