CD164 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424720

Übersicht

Cd164 kodiert CD164, ein sialomucinhaltiges, an der Zelloberfläche lokalisiertes Glykoprotein, das die Zelladhäsion unterstützt und den Transport hämatopoetischer und anderer Vorläuferzellen innerhalb von Gewebemikroumgebungen reguliert. CD164 ist am endosomalen Transport und an der Organisation von Rezeptoren an der Plasmamembran beteiligt und beeinflusst dadurch Signalgebung und Migrationsverhalten in Signalwegen, die mit Interaktionen in Stammzellnischen verknüpft sind. In Mausmodellen wird eine veränderte Cd164-Expression oder -Funktion im Zusammenhang mit Hämatopoese, Entwicklung von Immunzellen und Gewebeumbau untersucht. Eine Fehlregulation von CD164 wurde mit Veränderungen in Proliferation, Invasion und der Kommunikation mit der Mikroumgebung in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie und Mechanismen entzündlicher Erkrankungen relevant sind.

Das CD164 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cd164-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cd164-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cd164 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CD164-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cd164-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CD164-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cd164-Exone abzielen, die für die CD164-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cd164-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CD164 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CD164 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cd164-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CD164 HDR-Plasmid (m) und CD164 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cd164-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cd164-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.