Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD163 (h): sc-400435

Présentation

CD163 code pour un récepteur « scavenger » enrichi dans les macrophages et les monocytes, qui se lie aux complexes hémoglobine–haptoglobine et favorise leur élimination par endocytose, reliant ainsi le métabolisme de l’hème à des programmes antioxydants et de gestion du fer. Marqueur des états myéloïdes activés alternativement (de type M2), CD163 participe à des réseaux de signalisation immunorégulatrice qui modulent l’équilibre des cytokines, le remodelage tissulaire et la résolution de l’inflammation. L’activité de CD163 est associée à des processus de l’immunité innée, notamment la capture médiée par des récepteurs scavenger, le trafic lysosomal et le dialogue avec des voies inflammatoires dépendantes des TLR. Une expression altérée de CD163 sur les macrophages associés aux tumeurs et dans des contextes d’inflammation chronique constitue un axe pertinent pour étudier la polarisation myéloïde, l’immunosuppression et le remodelage du microenvironnement dans des modèles de maladies humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD163 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CD163 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CD163, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CD163 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD163.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CD163 pour l'étude de la signalisation de CD163, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CD163 essentiels à la fonction de CD163
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CD163 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CD163 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CD163 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CD163. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CD163 plasmide HDR (h) et le CD163 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CD163 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CD163 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.