CD16 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400544-ACT

FCGR3A は CD16（FcγRIIIa）をコードしており、IgG の Fc 部位に対して低〜中程度の親和性を示す受容体です。CD16 はナチュラルキラー（NK）細胞および単球／マクロファージの一部サブセットに高発現しています。CD16 は ITAM モチーフを持つアダプター鎖（FCER1G および CD247）と会合して、SYK、PI3K/AKT、PLCγ、MAPK などを含むシグナル伝達カスケードを開始し、抗体依存性細胞傷害（ADCC）、サイトカイン産生、免疫複合体の処理を統合します。本受容体は自然免疫の活性化、炎症制御、さらにエフェクター細胞機能を規定するインターフェロン経路や NF-κB プログラムとのクロストークにも関与します。FCGR3A の活性や細胞表面発現の変化は、自己免疫、慢性炎症、感染、腫瘍免疫における免疫応答の破綻と関連づけられており、ヒト免疫細胞モデルにおける機序研究を支持します。

CD16 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FCGR3Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD16 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FCGR3A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFCGR3A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD16の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFCGR3A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD16依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFCGR3A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD16経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。