Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD151 (h): sc-401969

Présentation

CD151 (tétraspanine‑24) est une tétraspanine à quatre segments transmembranaires qui organise des microdomaines enrichis en tétraspanines et sert de plateforme d’assemblage pour des complexes d’adhésion et de signalisation à la membrane plasmique. En s’associant à des intégrines liant la laminine telles que ITGA3/ITGB1 et ITGA6/ITGB4, CD151 régule l’adhésion cellule–matrice, l’étalement et la motilité cellulaires, et module la signalisation en aval via les voies des adhésions focales et du remodelage du cytosquelette. CD151 influence également le trafic membranaire et la biologie des exosomes, en façonnant la distribution des récepteurs et la propagation des signaux. Une expression ou une fonction dérégulée de CD151 a été associée à une altération de l’intégrité épithéliale et à des phénotypes invasifs en cancérologie, ainsi qu’à des atteintes physiopathologiques rénales et vasculaires, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD151 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CD151 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CD151, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CD151 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD151.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CD151 pour l'étude de la signalisation de CD151, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CD151 essentiels à la fonction de CD151
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CD151 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CD151 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CD151 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CD151. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CD151 plasmide HDR (h) et le CD151 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CD151 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CD151 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.