Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD151: sc-401969-ACT

CD151 (tétrapanine-24) est une tétrapanine humaine exprimée à la surface cellulaire qui organise des microdomaines enrichis en tétrapanines et module le trafic et la signalisation de récepteurs partenaires, en particulier des intégrines liant la laminine telles que ITGA3/ITGB1 et ITGA6/ITGB4. Via ces complexes, CD151 influence l’adhérence cellule–cellule et cellule–matrice, le remodelage du cytosquelette et la migration directionnelle, avec un impact sur des processus incluant l’intégrité épithéliale, les réponses angiogéniques et la motilité des cellules immunitaires. La signalisation associée à CD151 recoupe la dynamique des adhésions focales et des voies en aval liées à la régulation de l’actine et au dialogue entre récepteurs, façonnant le comportement invasif dans de multiples contextes cellulaires. Une expression dérégulée de CD151 ou un couplage tétrapanine–intégrine altéré a été associé, dans des systèmes expérimentaux, à des phénotypes pertinents pour la dissémination tumorale, la compétence métastatique et le remodelage vasculaire.

CD151 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD151 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD151 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD151 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD151, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD151. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD151 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD151 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD151 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD151 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.