CD137L Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423455

Panoramica

Tnfsf9 codifica CD137L (4-1BBL), un ligando della superfamiglia TNF espresso principalmente sulle cellule presentanti l’antigene che si lega a CD137 (TNFRSF9) per fornire potenti segnali costimolatori ai linfociti T e ad altri effettori immunitari. La segnalazione CD137L–CD137 promuove l’attivazione delle vie NF-κB e MAPK, sostenendo l’espansione e la sopravvivenza dei linfociti T, la produzione di citochine e la modulazione delle risposte di memoria, con effetti aggiuntivi sulla maturazione delle cellule dendritiche e sulla funzione delle cellule mieloidi. Nei modelli murini, l’attività di Tnfsf9 è implicata nella regolazione dei circuiti infiammatori e dell’omeostasi immunitaria, influenzando contesti quali autoimmunità, infiammazione cronica e sorveglianza immunitaria antitumorale. Questi ruoli rendono CD137L un nodo utile per analizzare fenotipi immunitari dipendenti dalla costimolazione e risposte guidate dall’antigene.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD137L (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tnfsf9 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tnfsf9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tnfsf9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD137L.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tnfsf9 per lo studio della segnalazione di CD137L, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tnfsf9 critici per la funzione di CD137L
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tnfsf9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD137L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CD137L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tnfsf9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD137L Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CD137L (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tnfsf9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tnfsf9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.