Plásmido CRISPR de Activación (h) CD137L: sc-404974-ACT

TNFSF9 codifica CD137L (4-1BBL), un ligando de la superfamilia TNF expresado en células presentadoras de antígeno que se une a CD137/TNFRSF9 en células T y células NK activadas para amplificar la señalización coestimuladora. Las interacciones CD137L–CD137 favorecen la maduración de la sinapsis inmunológica, la producción de citocinas y programas de supervivencia a través de las vías NF-κB y MAPK, moldeando respuestas citotóxicas y de memoria. Este eje contribuye a la regulación de microambientes inflamatorios y de la comunicación cruzada entre células inmunitarias en contextos como la autoinmunidad, la infección crónica y la inmunidad antitumoral, donde una coestimulación alterada puede modificar la función efectora y el agotamiento. Además, la señalización de CD137L puede influir en los estados de activación mieloide y en la dinámica de presentación de antígenos, aspectos relevantes para modelos de investigación en inmunología y oncología.

CD137L El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TNFSF9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD137L El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TNFSF9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TNFSF9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD137L. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TNFSF9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD137L en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD137L en células tumorales con expresión de TNFSF9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.