CD137 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405068-NIC

TNFRSF9（CD137、4-1BB）は、活性化T細胞、NK細胞、その他の免疫細胞サブセットに発現する誘導性のTNF受容体スーパーファミリー分子であり、活性化・生存・エフェクター分化を制御する共刺激性チェックポイントとして機能します。CD137がリガンドと結合するとアダプター分子のリクルートが起こり、下流でNF-κB、MAPK、PI3K/AKTシグナル伝達が活性化され、サイトカイン産生、増殖、代謝的適応能が支えられます。この経路は炎症組織や腫瘍微小環境における免疫細胞間相互作用を形成し、慢性炎症、自己免疫、がん免疫生物学の文脈で頻繁に研究されています。TNFRSF9の発現やシグナル動態の変化は細胞傷害性応答や免疫疲弊状態を調節し得るため、免疫制御の機構解析における有用な解析ノードとなります。

CD137 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TNFRSF9 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TNFRSF9内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TNFRSF9の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TNFRSF9が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。