Plásmido Doble Nickase (m) CD133: sc-437381-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)CD133 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CD133 (m) y el plásmido de doble nickasa CD133 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Prom1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD133 Anticuerpo (E-11): sc-365537
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) CD133 | sc-437381-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) CD133 | sc-437381-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Prom1 codifica la glicoproteína de membrana pentaspánica CD133, una proteína de unión al colesterol enriquecida en protrusiones de la membrana plasmática que ayuda a organizar microdominios de membrana y a regular la polaridad celular. En tejidos de ratón, CD133 se utiliza ampliamente como marcador de compartimentos de células madre y progenitoras, y se asocia con programas que controlan la autorrenovación, la diferenciación y la regeneración tisular. La señalización asociada a CD133 converge con vías que gobiernan la organización epitelial y la dinámica del citoesqueleto, y se han descrito alteraciones en la expresión de Prom1 en modelos de degeneración retiniana, defectos del neurodesarrollo y fenotipos de células iniciadoras de tumores. Por lo tanto, los estudios funcionales de Prom1 aportan información sobre mecanismos de compromiso de linaje, epitelios formadores de barrera y estados celulares tipo célula madre relevantes para la biología de las enfermedades.
CD133 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Prom1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Prom1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Prom1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Prom1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.