Plasmide Double Nickase (h) CD130/gp130: sc-400301-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CD130/gp130 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CD130/gp130 Double Nickase (h) et le plasmide CD130/gp130 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant IL6ST. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD130/gp130 Antibody (E-8): sc-376280
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CD130/gp130 | sc-400301-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CD130/gp130 | sc-400301-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IL6ST code CD130/gp130, la sous-unité commune de transduction du signal des récepteurs de la famille des cytokines IL‑6, qui relie la liaison du ligand à des cascades de kinases intracellulaires. Lors de la formation du complexe récepteur, gp130 active les kinases JAK et, en aval, STAT3/STAT1, et peut également engager les voies MAPK/ERK et PI3K–AKT afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant l’inflammation, la différenciation, la survie et les réponses de phase aiguë. En tant que nœud central de la signalisation des cytokines, une altération de la signalisation dépendante d’IL6ST est associée à une homéostasie immunitaire dérégulée et a été étudiée dans des contextes incluant des états inflammatoires chroniques et l’activation oncogénique de la voie STAT3. Ces propriétés font de gp130 une cible fréquente d’études mécanistiques sur la réponse aux cytokines, la reprogrammation transcriptionnelle et les interactions entre voies de signalisation dans les cellules humaines.
CD130/gp130 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IL6ST dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IL6ST. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IL6ST. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IL6ST.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.