Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ccr1l1 (m): sc-419703

Présentation

Ccr1l1 code une protéine apparentée à un récepteur de chimiokines de type CCR1, dont on prévoit qu’elle participe au trafic des leucocytes et aux réseaux de signalisation inflammatoire généralement contrôlés par des axes de chimiokines couplés à des récepteurs de type GPCR (récepteurs couplés aux protéines G). Bien que moins bien caractérisé que les membres canoniques de la famille CCR, Ccr1l1 est susceptible d’influencer la migration dirigée par les chimiokines, la localisation des cellules immunitaires et les voies en aval liées au remodelage de l’actine ainsi qu’à la régulation des circuits cytokines/chimiokines. Ces processus sont au cœur des réponses immunitaires innées et adaptatives et sont fréquemment impliqués dans des modèles de maladies inflammatoires, d’infection et de dynamique du microenvironnement tumoral–immunitaire. Ccr1l1 chez la souris constitue ainsi un point d’entrée utile pour étudier in vivo, et dans des systèmes de cellules primaires, la biologie adjacente aux récepteurs de chimiokines et les mécanismes d’immunorégulation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ccr1l1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ccr1l1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ccr1l1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ccr1l1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ccr1l1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ccr1l1 pour l'étude de la signalisation de Ccr1l1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ccr1l1 essentiels à la fonction de Ccr1l1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ccr1l1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ccr1l1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Ccr1l1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ccr1l1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ccr1l1 plasmide HDR (m) et le Ccr1l1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ccr1l1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ccr1l1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.