Plásmido CRISPR de Activación (h) CCP2: sc-410133-ACT

El AGBL2 humano codifica la carboxipeptidasa citosólica 2 (CCP2), una deglutamilasa dependiente de zinc que recorta las cadenas laterales de poliglutamato en la tubulina y otros sustratos para dar forma a los patrones de modificación postraduccional. Al regular el equilibrio de la glutamilación, CCP2 influye en la estabilidad de los microtúbulos, el transporte intracelular y los procesos relacionados con los cilios, con efectos posteriores sobre la división celular y la remodelación del citoesqueleto. La glutamilación alterada de la tubulina se asocia con defectos en la fidelidad mitótica y la función neuronal, y la desregulación de AGBL2 se ha investigado en contextos que implican proliferación aberrante y respuestas al estrés celular. Estas características hacen de CCP2 un punto útil para estudiar el “código de la tubulina” y la señalización impulsada por microtúbulos en células humanas.

CCP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AGBL2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CCP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AGBL2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AGBL2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CCP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AGBL2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CCP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CCP2 en células tumorales con expresión de AGBL2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.