Plásmido CRISPR de Activación (h) CCNB1/cyclin B1: sc-400114-ACT

CCNB1 codifica la ciclina B1, una subunidad reguladora esencial del complejo CDK1 que impulsa la transición G2/M y coordina la entrada en mitosis. La acumulación de ciclina B1 y su translocación al núcleo promueven la condensación de los cromosomas, la ruptura de la envoltura nuclear y el ensamblaje del huso mitótico, mientras que su degradación oportuna mediada por ubiquitina por el complejo APC/C facilita la salida de la mitosis. La actividad de CCNB1 se integra con los puntos de control por daño en el ADN y las vías de vigilancia del ciclo celular para garantizar una replicación y segregación fieles del genoma. La expresión desregulada de CCNB1 se asocia con frecuencia a proliferación aberrante, inestabilidad cromosómica y fenotipos del ciclo celular vinculados a tumores, lo que la convierte en un marcador ampliamente utilizado y en un nodo mecanístico en estudios del control mitótico.

CCNB1/cyclin B1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CCNB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CCNB1/cyclin B1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CCNB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CCNB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CCNB1/cyclin B1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CCNB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CCNB1/cyclin B1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CCNB1/cyclin B1 en células tumorales con expresión de CCNB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.