CCL27 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422842
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CCL27 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CCL27, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CCL27 Anticuerpo (G-6): sc-390112
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CCL27 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422842 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Ccl27a codifica la quimiocina CCL27 (también conocida como CTACK), una quimiocina CC asociada a la piel que ayuda a coordinar el tráfico de leucocitos al formar gradientes que guían a las células T que expresan CCR10 hacia sitios epiteliales. CCL27 contribuye a la migración celular impulsada por quimiocinas, la vigilancia inmunitaria y la señalización inflamatoria dentro del microambiente cutáneo, influyendo en las interacciones entre queratinocitos y linfocitos infiltrantes. La actividad desregulada del eje CCL27–CCR10 se ha vinculado con inflamación cutánea y un reclutamiento alterado de células inmunitarias en modelos de procesos patológicos tipo dermatitis. Por ello, en sistemas murinos se estudia ampliamente Ccl27a para desentrañar mecanismos de quimiotaxis selectiva por tejido y regulación inmunitaria epitelial.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CCL27 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ccl27a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ccl27a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ccl27a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CCL27.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ccl27a para la investigación de la señalización de CCL27, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ccl27a críticos para la función de CCL27
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ccl27a para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CCL27 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CCL27 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ccl27a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CCL27 (m) y el plásmido HDR CCL27 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ccl27a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ccl27a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.