CCDC90A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406721

Descripción general

MCUR1 (también conocido como CCDC90A) codifica una proteína de la membrana interna mitocondrial que favorece la captación de calcio mitocondrial al modular el complejo del uniportador de calcio mitocondrial. Mediante la regulación de los niveles de Ca²⁺ en la matriz, CCDC90A vincula la señalización del calcio con la fosforilación oxidativa, la actividad enzimática del ciclo del TCA y la homeostasis bioenergética celular, con efectos posteriores sobre las especies reactivas de oxígeno y las respuestas al estrés. La alteración de la función de MCUR1/CCDC90A se ha asociado con cambios en el metabolismo mitocondrial y con una mayor vulnerabilidad a la disfunción mitocondrial, lo que la hace relevante para estudios de estrés cardiometabólico, neurobiología y adaptación metabólica de células cancerosas. Como nodo de señalización mitocondrial, se investiga con frecuencia en vías que conectan el manejo del calcio, la susceptibilidad a la apoptosis y el control de calidad mitocondrial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CCDC90A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MCUR1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MCUR1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MCUR1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CCDC90A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MCUR1 para la investigación de la señalización de CCDC90A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MCUR1 críticos para la función de CCDC90A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MCUR1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CCDC90A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CCDC90A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MCUR1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CCDC90A (h) y el plásmido HDR CCDC90A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MCUR1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MCUR1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.