CCDC57 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-427913

Descripción general

Ccdc57 codifica la proteína CCDC57 que contiene un dominio de tipo *coiled-coil*, un factor predicho asociado al citoesqueleto y a orgánulos, implicado en la organización de procesos dependientes de microtúbulos. Las proteínas *coiled-coil* actúan con frecuencia como andamiajes que sostienen la integridad del centrosoma, el tráfico intracelular y la progresión del ciclo celular, lo que vincula a CCDC57 con vías que regulan la dinámica del huso mitótico y la regulación espacial de la señalización. En sistemas de ratón, la alteración de proteínas de estas redes se estudia comúnmente por sus efectos sobre la proliferación, la estabilidad genómica y la diferenciación celular. Por ello, CCDC57 es relevante para áreas de investigación mecanística que se solapan con fenotipos del desarrollo y con defectos asociados a enfermedad en la organización del citoesqueleto y el control mitótico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CCDC57 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ccdc57 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ccdc57 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ccdc57 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CCDC57.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ccdc57 para la investigación de la señalización de CCDC57, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ccdc57 críticos para la función de CCDC57
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ccdc57 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CCDC57 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CCDC57 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ccdc57. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CCDC57 (m) y el plásmido HDR CCDC57 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ccdc57 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ccdc57 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.