Partículas Lentivirales de Activación (h) CCDC23: sc-415702-LAC

SVBP codifica la pequeña proteína de unión a vasohibina, también conocida como CCDC23, que actúa como cofactor esencial de las proteínas vasohibina y favorece su actividad de carboxipeptidasa de tubulina responsable de la detirosinación de la α-tubulina. Mediante la regulación de modificaciones postraduccionales de los microtúbulos, SVBP influye en la dinámica del citoesqueleto, la organización del huso mitótico, el tráfico intracelular y la migración celular. Las alteraciones en la detirosinación de los microtúbulos se han implicado en defectos de la división celular y en fenotipos asociados a la motilidad, lo que proporciona un vínculo mecanístico con vías relevantes para la biología del cáncer y los procesos del neurodesarrollo. En consecuencia, la modulación de la expresión de SVBP/CCDC23 resulta útil para estudiar la señalización dependiente de microtúbulos, el transporte de orgánulos y la remodelación del citoesqueleto en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CCDC23 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SVBP en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CCDC23 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SVBP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CCDC23. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SVBP y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.